Имунохистохимия (igh-анализ) на гърдата

Понякога резултатите от хистологията са недостатъчни. Ако не е възможно да се получи окончателен отговор и да се постави диагноза или е необходимо да се изяснят молекулните параметри на туморната формация, се предписва имунохистохимично изследване.

Какво е

Като допълнителен метод се използва методът на имунохистохимията. Той помага да се идентифицират специфични протеини в биологичния материал, които са характерни за определен тип клетки и в резултат да се разграничи един вид образуване на тумор от друг. Също така, проучването помага да се идентифицират:

1. Имунохистохимични маркери, които са отговорни за чувствителността на тумора към ефектите на лекарства, лъчева терапия.
2. Метастатичният характер на произхода на образуването и определят първоизточника на лезията.
3. Хормони и рецептори за тях.
4. Клетъчно злокачествено заболяване.

IHC като диагностичен метод се използва широко в онкологията. Този тип изследване на тъканите включва използването на определени реактиви. Те съдържат антитела или протеинови съединения, които са маркирани с определени вещества.

ВАЖНО! Антителата (имуноглобулини, специфични протеини) се произвеждат от различни клетки на тялото и осигуряват имунитет при въвеждането на антигена. Често се произвеждат от вируси, бактерии, онкология, ваксинация, трансплантация на тъкани, а понякога и срещу собствените им клетки, което води до автоимунни патологии. Вземете ги от различни животни.

При контакт с антигени, които могат да се съдържат в изследваната биопсия, настъпва специфична реакция (антигените са междуклетъчни вещества на тъканта, компоненти на клетъчните структури). В резултат на това може да се прецени за наличието или отсъствието на това или онова вещество в тъканите..

ВАЖНО! Антигените са генетично чуждо тяло, което при поглъщане предизвиква имунен отговор, а именно производството на антитела за потискане на този чужд агент. В случай на IHC анализ, антигените са молекули, които се произвеждат от патологично променени туморни клетки.

Структурна специфичност на изследването - фундаментално отличава IHC от другите методи на имунологична диагностика, които използват реакцията антиген-антитела. Тоест, експертите оценяват, освен наличието на определени вещества в тъканите (със или без оцветяване) и количествения им състав (според интензивността на оцветяването), и пространственото разпределение на различни структурни елементи (цитоплазма, ядро, клетъчна мембрана и др.) В тънка оцветена кройка.

Изследователски методи

Реакцията може да се получи по няколко начина. Често се използва Direct, при който се използва един вид маркирани антитела. Последният трябва да се свърже с откриваемо вещество или целева молекула. Ако последният присъства в пробата за биопсия, тогава изследваната тъкан се оцветява.

Индиректният метод се счита за по-информативен и чувствителен. Същността му се състои във поетапното въвеждане на 2 различни антитела. Немаркираните първични антитела реагират с туморния антиген в биопсичния образец и образуват комплекс антитяло-антиген. След това се инжектират вторични, вече маркирани антитела (реагент), които се свързват със специфична част от молекулата на първичното антитяло. Тоест първичните антитела са антигени за вторичните.

Когато е планирано проучването?

IHC се предписва, когато обичайното хистологично изследване е недостатъчно. Например, когато туморът на гърдата има неспецифична микроскопска структура, която не позволява точна окончателна диагноза.

Какво показва

Биопсията с имунохистохимия е важна част от верификацията на диагнозата за рак на гърдата, простатата, меките тъкани и др. Особено важно е да се изследват лимфоми, тъй като често е невъзможно да се диагностицира това заболяване без IHC. Изследването на IHC играе важна роля за определяне на хистологичния тип недиференцирани туморни образувания, както и метастази, които имат необясним първичен фокус.

Имунохистохимията на рака на гърдата е полезна за прогнозиране на хода на туморния процес и възможността за целенасочена терапия. Помага да се оцени:

• функционално състояние на образователните клетки;
• злокачествен потенциал и скорост на растеж на тумора;
• тенденция към метастази.

Как се прави анализът?

За провеждане на проучване са необходими проби от самия тумор и околните тъкани. Те могат да бъдат получени с биопсия или след операция. Материалът трябва да премине през няколко етапа на подготовка преди изследването: фиксиране, изплакване, дехидратация, потапяне в парафин или вграждане с друго вещество.

Изследваният биологичен обект трябва да е твърд, но не и крехък. Първо материалът се измива, дехидратира и уплътнява в алкохоли с нарастваща якост. След това се избистря чрез потапяне в смес от абсолютен алкохол и О-ксилол в съотношение 1: 1. След това се поставя на няколко порции чист О-ксилол. И едва тогава биологичният обект се импрегнира в парафин. Последният етап помага да се запази тъканта и да се запазят нейните структурни характеристики в парафиновия блок за дълго време..

След това лаборантът прави филийки от тези блокове с помощта на специално устройство - микротом, с дебелина до 1 микрон. Получените срезове се залепват върху предметно стъкло, което се намазва с глицерин и смес от протеин. Суха.

За да може тестваният материал да реагира с антитялото, е необходимо да се обезмасли и да се отстрани парафинът. Процедурата се нарича депарафинизация. За неговото изпълнение се използват 3 порции О-ксилол, както и алкохоли с низходяща сила.

Последната стъпка е оцветяването. Извършва се, за да се види ясно структурата на тъканите под микроскоп. Лаборантите могат да използват голямо разнообразие от багрила. Те могат да бъдат класифицирани условно по:

• произход, например, животни - кармин, растителни - хематоксилин, синтетични - еозин;
• химични свойства, например неутрални, основни, киселинни.

Най-често за тази процедура се използват еозин, хематоксилин. Биологичният материал се поставя в хематоксилинов разтвор за няколко минути, след това се измива и резултатите от оцветяването се диференцират. След това се осигурява оцветяване в еозин, измиване и дехидратация в алкохоли с възходяща сила. Последователното многостепенно оцветяване дава възможност все повече и повече да определят нозологията и фенотипа на образуването на тумора на всеки етап. Патологът изследва материала под микроскоп след всяко оцветяване. И само след оценка на промените и интерпретиране на получената информация, той предписва панел от антитела.

За да получи точни данни за патологичния процес и да провери заболяването, лаборантът пристъпва към обработката на подготвената проба със специални реактиви, съдържащи маркирани антитела. Резултатът е реакция между антитялото и антигена. Това е придружено от характерна визуализация, която зависи от веществата, използвани за етикетиране.

Какво означават резултатите?

Имунохистохимията на млечната жлеза е сложен многоетапен анализ, резултатът от който се влияе от много фактори, например лошо качество на реагентите, недостатъчно фиксиране на изследвания биологичен обект или неправилно подбран панел от антитела. Броят на целевите клетки се търси в стотици, така че специалистът трябва да разбере какво търси и да използва необходимите антитела за това..

Хистолозите оценяват интензивността на оцветяването на туморните клетки след взаимодействие с реагентите по специална скала:

• 0-1 + - няма онкология;
• 2+ - отрицателно онкологично образование;
• 3+ - положително онкологично образование.

Продължителността на IHC при рак на гърдата до голяма степен зависи от начина на приложение. Има ръчни и автоматични. Последното се счита за по-съвършено, тъй като вероятността от техническа грешка е сведена до минимум и се извършва много по-бързо..

Преди да определи тактиката на лечението, онкологът задава различни въпроси: каква е вероятността от рецидив на заболяването при пациент или смъртта му, какъв резултат от лечението може да се очаква. За да направи това, специалист проучва характеристиките и характеристиките на тумора и в зависимост от различни прогнозни и прогностични фактори предписва тактики на лечение.

Прогностични фактори

Тези фактори включват основните признаци, които определят характеристиките на хода на заболяването и неговия резултат. За операбилните форми на рак на гърдата тези фактори включват: морфологична структура новообразувания и неговия размер, състоянието на лимфните възли. Тоест такива характеристики определят хронологията на заболяването.

Характеристики на прогностичните фактори:

1. Въз основа на биологичните характеристики на образуването на тумор.
2. Взаимовръзка с продължителността на живота на пациента, независимо от тактиката на терапията.
3. Разделете пациентите според степента на риск от смърт, рецидив.
4. Примери: индекс на митотична активност, протеолитични ензими, антиогенеза и др..

Индексът на митотична активност (MAI) е независим прогностичен фактор, който характеризира продължителността на живота на пациентите. При пациенти с индекс под 10 по време на проследяването леталният изход е бил 6%, при пациентите с индекс над 10 - 28%.

Протеолитичните ензими са важни в процеса на метастази. В трансформирани злокачествени клетки се произвеждат повече такива ензими, отколкото в здрави, следователно при злокачествени образувания се наблюдава освобождаването на тези вещества в междуклетъчното пространство и увеличаване на активността. Тоест ензимите участват в процеса на онкогенезата. Т. около. пациентите с ниски нива на тези ензими имат по-добра прогноза за оцеляване без болести.

Способността на новообразувание да расте и метастазира до голяма степен зависи от ангиогенезата - образуването на нови кръвоносни съдове. По време на наблюдението на пациентите в продължение на 10 години беше установено, че при жени с висока стойност на плътността на микросъдовете в тумора прогнозата е по-лоша..

Прогнозни фактори

Тези фактори предсказват ефективността на лечението. Те помагат да се идентифицира група пациенти с повече или по-малко значим отговор на терапията. Например, за да се определи ефективността на хормоналните лекарства, нивото на рецепторите на стероидни хормони.

Клиничните фактори, които помагат да се интерпретира отговорът на терапията при метастатичен рак, включват:

1. Локализация и количествен показател за метастази. Например при увреждане на костта - прогнозата е относително благоприятна - увреждане на костта, 2 органа, белите дробове - по-неблагоприятна - с увреждане на повече от 2 органа, наличие на метастази в черния дроб, мозъка и др. - неблагоприятна.
2. Интервалът от време между лечението на първичната неоплазма и появата на метастази. Колкото по-дълго е, толкова по-благоприятна е прогнозата..
3. Общото здравословно състояние на пациента.
4. Възрастова категория. Жените в постменопауза са по-склонни да реагират благоприятно на терапията.
5. Рецептори на стероидни хормони в тумора (хормонално-независимите новообразувания не реагират на хормонално лечение).

Метастатичният рак на гърдата се счита за хронично състояние. След пълна регресия в резултат на химиотерапия, продължителността на живота от 5-10 години е доста рядка, в около 5-20% от случаите. Следователно за лечение се счита за най-добрият вариант - последователно използване на терапевтични ефекти с възможно най-ниска токсичност, за да се получи максимален палиативен ефект и да се забави прогресията на патологията, смъртта.

Надеждността на резултатите от IHC на гърдата достига 99%. Техниката е чувствителна и силно специфична. Той помага да се провери патологичният процес и да се установи стадият на заболяването. За изпълнението му е необходим минимум биопсичен материал и реагенти, докато той ще бъде информативен дори след дълго време след вземане на биопсия.